IHC實驗方法推薦將基于免疫組化的表達譜而開發的Prestige Antibodies?按照以下所描述的標準IHC染色實驗方法進行使用。Prestige

IHC實驗方法

推薦將基于免疫組化的表達譜而開發的Prestige Antibodies?按照以下所描述的標準IHC染色實驗方法進行使用。

脫蠟Prestige Antibody脫蠟

將厚度為4 μm的石蠟切片在50 °C烘烤過夜。在免疫染色之前，在二甲苯和分級乙醇和分級乙醇制蒸餾水中進行脫蠟和水化。在水化過程中，在95％乙醇中的0.3％ H2O2中對內源性過氧化物酶進行封閉5分鐘。

標準抗原修復方法

標準抗原修復方法是在pH 6的修復緩沖液中通過使用高壓鍋爐（Decloaking室，Biocare Medical，Walnut Creek，CA，美國）作為熱源而進行的熱誘導表位修復（HIER）。

可通過將浸沒在修復緩沖液中的TMA玻片在壓力鍋爐中125°C加熱4分鐘而進行HIER。在完全煮沸后，玻片會被保留在壓力鍋爐中并冷卻至90 °C。總處理時間約為45分鐘。

注意：第一抗體的特定工作稀釋比僅作為指南參考。最佳的稀釋比必需由用戶進行確定。

免疫組化染色程序，AUTOSTAINER 480?

所有的孵育過程都是在室溫的。

所有試劑用于每張玻片上的體積都是300 μL。

1. 在洗滌緩沖液中漂洗。

2. 用Ultra V Block孵育5分鐘。

3. 在洗滌緩沖液中漂洗（x2）。

4. 用一抗孵育30分鐘。

5. 在洗滌緩沖液中漂洗（x3）。

6. 用一抗增強劑孵育20分鐘。*

7. 在洗滌緩沖液中漂洗（x2）。*

8. 用標記的聚合物孵育30分鐘。

9. 在洗滌緩沖液中漂洗（x2）。

10. 在DAB溶液中顯影5分鐘。

11. 在蒸餾水中漂洗。

12. 在蘇木精中復染5分鐘。**

13. 在自來水中漂洗5分鐘。**

14. 在1:5稀釋的碳酸鋰水飽和溶液中漂洗1分鐘。**

15. 在自來水中漂洗5分鐘。**

16. 在分級乙醇和二甲苯中脫水**

17. 蓋上玻片。

* 對于多克隆抗體可忽略第6和7步。

** 第14 - 16步是在組織染色儀（Leica Autostainer XL）中進行的。

試劑

· 洗滌緩沖液（10x濃度）。原始含有0.05% (v/v) Tween 20的工作溶液。加入多余的Tween 20至0.20%的終濃度。

· 修復溶液：Citrate buffer?，pH 6.

· 抗體稀釋液。

· Mayer蘇木精

· 二甲苯

替代的抗原修復方法

對于特定的抗體，可按照產品數據表中所述，使用替代的修復緩沖液或酶法抗原修復方法。

酶法抗原修復

酶法抗原修復是在免疫染色儀器中進行的，指在室溫下將TMA玻片在蛋白酶K中孵育10分鐘。

pH 9的修復緩沖液中的熱誘導表位修復（Hier）

pH 9的修復緩沖液中的HIER可作為標準的HIER，除非使用了pH 9而非pH 6的修復緩沖液。